单核细胞分离成熟的树突状细胞与pluribead®

隔离

样品材料	10毫升人形水仙衣
隔离方法	使用280µl CD14 S-pluriBead®抗人类或300µl M-pluriBead®抗人类的非磁性材料。
产量	~6 * 10^6 S-pluriBead® 或 ~12 * 10^6 M-pluriBead®
生命力	>92% (胰岛素蓝染色)
纯度	~97%

单核细胞分离、分化和刺激方案

用提供的洗涤缓冲液（PBS + 0,05％BSA和2mM EDTA，pH值7,4）洗涤样品材料两次，以减少可溶性CD14。添加pluriBead CD14用于分离单核细胞到样品管中，并在pluriPlix或擦拭滚动混合器上孵育20分钟。

分离后，将细胞重悬于1ml RPMI 1640-medium（+10％FCS和1x Pen/Strep）中，并确定细胞数。对于单核细胞在24孔细胞培养板中的培养，每孔使用100万个细胞，并用1ml单核细胞-培养-培养液（RPMI 1640 + 10％FCS，1x Pen/Strep，2000 U/ml GM-CSF und 200 U/ml IL-4）在37℃和5％二氧化碳下培养。

24h后，取出培养基，加入1ml新鲜的单核细胞-培养-介质。然后，再将细胞培养4天。共5天后，用100ng/ml LPS再刺激细胞24h。然后用胰蛋白酶去除活化的细胞，并通过CD1a、CD14和CD83的荧光分析来检测单核细胞成熟到腹膜细胞的速度。