| Material de muestra | 50 ml de sangre entera con EDTA |
| Método de aislamiento | No magnético con 300 µl CD19 S-pluriBeads® anti-humano |
| Rendimiento | ~3.5 * 10^6 linfocitos B |
| Vitalidad | >99% (Tinción de azul de tripán) |
| Determinación de la pureza | Tinción de anticuerpos anti-CD20-FITC seguida de un análisis FACS |
| Pureza | ~97% de lymhocytes B |
Tras la activación del objetivo, se determinó la frecuencia de las células plasmáticas secretoras de anticuerpos (ASC) a través del ELISpot.
Las células B aisladas habían sido estimuladas durante 5 días con una mezcla de activación policlonal. Después, habían crecido en una placa recubierta con el antígeno específico. Después de 24 horas de incubación, el ensayo había sido procesado.
Los spots se habían contado y evaluado con un software específico (AID ELISpot6.0 iSpot). En el diagrama adyacente, los números azules reflejan el recuento de manchas específicas de antígeno por pozo.
Fig 1: Pureza de los linfocitos B aislados y estimulados
Fig 2: Análisis ELISpot de células específicas anti-Ig en duplicados. d1d2: 250 células/pozo cada uno, d3d4: 500 células/pozo cada uno, d5d6: células no activadas (500 células/pozo cada uno)
Fig 3: d7d8: anti-influenza-nucleocápside específico Células de memoria B, d9d10: nti-Tétanos-toxoide específico Células de memoria B, d11d12: Control negativo
El S-pluriBead® CD19 permitió aislar los linfocitos B de una muestra de sangre humana con una pureza de ~ 97%.
Los objetivos aislados mostraron una vitalidad de >99% después de la coloración azul de Trypan. Habían sido cultivadas con éxito en un cultivo celular, así como diferenciadas de las células plasmáticas secretoras de anticuerpos (ASC). Las CSA resultaron adecuadas para el análisis de la respuesta de las células B con memoria específica de antígeno mediante el ensayo ELISpot. Los resultados habían sido comparables a los obtenidos con un método de referencia (Dynabeads® CD19 Pan B).
Para el método de referencia, véase la publicación: Bussmann BM, Reiche S, Bieniek B, Krznaric I, Ackermann F, Jassoy C: Loss of HIV-specific memory B-cells as a potential mechanism for the dysfunction of he humoral immune response against HIV. Virology 2010; 397(1):7-13.)
La Compañía de Separación de Células 
