| Materiale campione | 10 ml di mantello di bufalo umano |
| Metodo di isolamento | Non magnetico con 280µl CD14 S-pluriBead® antiumano S-pluriBead® 280µl o 300µl M-pluriBead® antiumano |
| Rendimento | ~6 * 10^6 S-pluriBead® o ~12 * 10^6 M-pluriBead® |
| Vitalità | >92% (Colorazione blu Trypan) |
| Purezza | ~97% |
Lavare due volte il materiale campione con il tampone di lavaggio fornito (PBS + 0,05 % BSA e 2 mM EDTA, pH 7,4) per ridurre il CD14 solubile. Aggiungere pluriBead CD14 per l'isolamento dei monociti nella provetta del campione e incubare su un pluriPlix o su un miscelatore a rulli per 20 minuti.
Dopo l'isolamento, risospendere le cellule in 1ml di RPMI 1640-medium (+10 % FCS e 1x Pen/Strep) e determinare il numero di cellule. Per la coltivazione di monociti in una piastra di coltura cellulare a 24 pozzetti, vengono utilizzate 1 milione di cellule per pozzetto e incubate con 1ml di monociti-coltura-medio (RPMI 1640 + 10 % FCS, 1x Pen/Strep, 2000 U/ml GM-CSF e 200 U/ml IL-4) a 37 °C e 5 % di diossido di carbonio.
Dopo 24 ore, rimuovere il mezzo e aggiungere 1 ml di monocito fresco di coltura-medio. Poi, le cellule vengono coltivate per altri 4 giorni. Dopo un totale di 5 giorni, stimolare le cellule con 100ng/ml LPS per altre 24 ore. Le cellule attivate vengono poi rimosse con tripsina e il tasso di maturazione delle cellule dentritiche dei monociti viene rilevato da un'analisi fluorescente di CD1a, CD14 e CD83.
Analisi in fluorescenza di cellule dentritiche mature CD11a+, CD14+, CD83+
Cellule CD14+ dopo l'isolamento in coltura, maturazione dei monociti a cellule dendritiche dopo 5 giorni di coltura con GM-CSIF/IL-4 e stimolazione con LPS
La società di separazione delle celle 
